پیپٹائڈس غیر مستحکم ہونے کی وجوہات
ڈیامیڈیشن ردعمل:deacylation رد عمل میں، Asn/Gln کی باقیات کو Asp/Glu بنانے کے لیے ہائیڈولائز کیا جاتا ہے۔
غیر-انزیمیٹک ڈیمیڈیشن رد عمل کی کارروائی۔ موجود ہیں Asn-Gly- ساخت میں موجود امائیڈ گروپس کو ہائیڈولائز کرنا آسان ہے، اور سالمے کی سطح پر موجود امائیڈ گروپس کو ہائیڈرولائز کرنا بھی انو کے اندر موجود امائیڈ گروپس کے مقابلے میں آسان ہے۔
آکسائڈائزڈ پولی پیپٹائڈ حل آسانی سے آکسائڈائز ہونے کی دو اہم وجوہات ہیں۔
سب سے پہلے، حل میں پیرو آکسائیڈ آلودگی ہے.
دوسرا پولی پیپٹائڈس کا بے ساختہ آکسیکرن ہے۔
تمام امینو ایسڈ کی باقیات میں، Met، Cys اور His, Trp، Tyr وغیرہ آکسیڈیشن کے لیے سب سے زیادہ حساس ہیں۔ آکسیجن جزوی دباؤ، درجہ حرارت اور بفر محلول کا بھی آکسیکرن پر اثر پڑتا ہے۔
ہائیڈرولیسس:پولی پیپٹائڈس میں پیپٹائڈ بانڈ آسانی سے ہائیڈولیسس کے ذریعہ ٹوٹ جاتے ہیں۔ Asp پر منحصر ہے تشکیل میں شامل پیپٹائڈ بانڈ دوسرے پیپٹائڈ بانڈز، خاص طور پر Asp-Pro اور Asp-Gly Peptide بانڈز سے زیادہ آسانی سے ٹوٹ جاتے ہیں۔
غلط ڈسلفائیڈ بانڈز کی تشکیل:ڈسلفائیڈ بانڈز کے درمیان یا ڈسلفائیڈ بانڈز اور سلفہائیڈرل گروپس کے درمیان تبادلہ غلط ڈسلفائیڈ بانڈز تشکیل دے سکتا ہے، جس کے نتیجے میں ترتیری ساخت میں تبدیلی اور سرگرمی کا نقصان ہوتا ہے۔
ریسمائز: Gly کو ہٹا دیں سوائے، تمام امینو ایسڈ کی باقیات کاربن کے ایٹم تمام چیرل ہیں اور بیس کیٹالیسس کے تحت ریسیمائزیشن کے رد عمل کا شکار ہیں۔ Asp میں باقیات ریسیمائزیشن کے رد عمل کے لیے سب سے زیادہ حساس ہیں۔
-ختم کریں:-خاتمہ کاربن ایٹموں پر گروپوں کے خاتمے میں امینو ایسڈ کی باقیات سے مراد ہے۔ Cys, Ser, Thr, Phe, Tyr تمام باقیات - انحطاط کو ختم کر سکتے ہیں۔
الکلائن پی ایچ میں ہونے کا خطرہ -خاتمہ، درجہ حرارت اور دھاتی آئنوں کا بھی اس پر اثر پڑتا ہے۔
Denaturation، adsorption، aggregation یا precipitation denaturation کا تعلق عام طور پر ترتیری ڈھانچے اور ثانوی ڈھانچے کی تباہی سے ہوتا ہے۔ منحرف حالت میں، پیپٹائڈس اکثر کیمیائی رد عمل کے لیے زیادہ حساس ہوتے ہیں اور ان کی سرگرمی کو بحال کرنا مشکل ہوتا ہے۔ پولی پیپٹائڈس کے ڈینیچریشن کے عمل کے دوران، سب سے پہلے انٹرمیڈیٹس بنتے ہیں۔ عام طور پر انٹرمیڈیٹس کی حل پذیری کم ہوتی ہے اور وہ آسانی سے جمع ہوتے ہیں اور مجموعے بناتے ہیں، جس کے نتیجے میں مرئی ورن بنتی ہے۔
پیپٹائڈ کے استحکام کو بہتر بنانے کے لیے سفارشات
1) سائٹ-ڈائریکٹڈ mutagenesis: پولی پیپٹائڈس کے استحکام کو جینیاتی انجینئرنگ کے ذریعہ بہتر بنایا جا سکتا ہے تاکہ ان اوشیشوں کو تبدیل کیا جا سکے جو پولی پیپٹائڈ عدم استحکام کا سبب بنتے ہیں یا ایسی باقیات کو متعارف کراتے ہیں جو پولی پیپٹائڈ کے استحکام کو بڑھا سکتے ہیں۔
2) کیمیائی ترمیم:پولی پیپٹائڈس کے لیے کیمیائی ترمیم کے بہت سے طریقے ہیں، اور سب سے زیادہ زیر مطالعہ پی ای جی گرومنگ ہیں۔ پی ای جی یہ ایک پانی میں گھلنشیل پولیمر مرکب ہے جو جسم میں انحطاط پذیر اور غیر-زہریلا ہے۔ PEG پولی پیپٹائڈس کے ساتھ ملاپ کے بعد، یہ پولی پیپٹائڈ کی حل پذیری کو بہتر بنا سکتا ہے، بائیو کمپیٹیبلٹی کو ایڈجسٹ کر سکتا ہے، تھرمل استحکام کو بہتر بنا سکتا ہے، پروٹیز کے ذریعے انحطاط کے خلاف مزاحمت کر سکتا ہے، اینٹی جینیسیٹی کو کم کر سکتا ہے، اور جسم میں نصف-زندگی کو بڑھا سکتا ہے۔ مناسب ترمیم کے طریقہ کار کا انتخاب اور ترمیم کی ڈگری کو کنٹرول کرنے سے اصل مصنوعات کی حیاتیاتی سرگرمی کو بہتر یا بہتر بنایا جا سکتا ہے۔
3) اضافی:پیپٹائڈس کے استحکام کو اضافی اشیاء جیسے شکر، پولیول، جیلیٹن، امینو ایسڈ، اور بعض نمکیات شامل کرکے بہتر بنایا جا سکتا ہے۔ شکر اور پولیول کم ارتکاز پر پروٹین کے ارد گرد زیادہ پانی کے مالیکیولز کو مجبور کرکے پیپٹائڈ کے استحکام کو بڑھاتے ہیں۔ منجمد-خشک ہونے کے عمل کے دوران، مذکورہ بالا-مادیں پانی کی جگہ لے سکتے ہیں اور پولی پیپٹائڈ کے ساتھ ہائیڈروجن بانڈ بنا سکتے ہیں تاکہ پولی پیپٹائڈ کی قدرتی شکل کو مستحکم کیا جا سکے، اور خشک مصنوعات کے شیشے کی منتقلی کے درجہ حرارت کو بھی بڑھا سکتے ہیں۔ اس کے علاوہ سرفیکٹینٹس جیسے SDS، Tween، Pluronic، یہ سطح پر جذب ہونے، جمع ہونے اور پولی پیپٹائڈس کی بارش کو روک سکتا ہے۔
4) منجمد-خشک:کیمیائی رد عمل کا ایک سلسلہ جو پولی پیپٹائڈس میں ہوتا ہے جیسے کہ ڈیمیڈیشن، -خاتمہ، ہائیڈولیسس، وغیرہ سبھی میں پانی کی شرکت کی ضرورت ہوتی ہے، اور پانی کو دوسرے ری ایکٹنٹس کے لیے موبائل فیز کے طور پر بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔ اس کے علاوہ، پانی کے مواد کو کم کرنے سے پولی پیپٹائڈ کے درجہ حرارت میں اضافہ ہوسکتا ہے۔ لہذا، lyophilization پیپٹائڈس کے استحکام کو بہتر بناتا ہے