ٹھوس-فیز رال سے پیپٹائڈس کو صاف کرنے کے دو طریقے

ٹھوس مرحلہ Fmoc کیمیائی طور پر پیپٹائڈس کی ترکیب کے بعد، کلیویج کے بہت سے طریقے ہیں۔ اب ہم دو بنیادی اقسام متعارف کرائیں گے جو عام طور پر ہر کوئی استعمال کرتا ہے۔

خشک رال کو شیکر فلاسک میں رکھیں اور مناسب مقدار میں سکیوینجر (Scavengers) Cleaving reagent trifluoroacetic acid (TFA)، 10-25ml/g رال ڈالیں، ڈھانپیں اور کمرے کے درجہ حرارت پر وقفے وقفے سے ہلائیں۔ نئے TFA کے ساتھ رال کو فلٹر کریں رال کو 2-3 بار دھوئیں، فلٹریٹ کو یکجا کریں، اور ڈراپ وائز میں برفانی آسمان کے حجم سے 8-10 گنا اضافہ کریں۔ بعض اوقات اس کے کچھ حصے کو TFA سے بھاپ میں ڈالا جا سکتا ہے ایک خام پیپٹائڈ پریکیٹیٹ حاصل کیا گیا تھا۔ بارش کی کارکردگی کو بہتر بنانے کے لیے ڈائیتھائل ایتھر کو برف کے ساتھ ٹھنڈا کیا جا سکتا ہے۔ آخر میں، تیز خام پیپٹائڈ جمع کریں.

قابل اطلاق رال:کنگ رال یا رنک امائڈ رال

1% TFA:

پولی پیپٹائڈ-ہینگنگ رال کو ایک محلول میں شامل کیا گیا تھا جس میں 1% TFA تھا ڈائیکلورومیتھین محلول گلاس شیک فلاسک کو سیل کر کے 2 منٹ تک ہلایا گیا تھا۔ فلٹریٹ کو ایک اور نئے میتھانول شیک فلاسک میں ڈالنے کے لیے نائٹروجن کا استعمال کریں جس میں 10% پائریڈین ہو۔ مذکورہ بالا عمل کو 10 بار دہرائیں۔ 30 ملی لیٹر DCM، 30 ملی لیٹر MeOH استعمال کریں باقی محفوظ پیپٹائڈس کو رال پر تین بار ترتیب وار دھوئے۔ TLC یا HPLC کے ذریعے صفائی کی باقیات کو چیک کریں۔ تمام فلٹریٹ کو یکجا کریں اور سالوینٹ کو کم دباؤ کے تحت بخارات بنائیں تاکہ 5% حجم چھوڑ دیں۔ 40 ملی لیٹر پانی شامل کریں، اور برف نے مکسچر کو ٹھنڈا کر دیا تاکہ بارش میں مدد ملے۔ فلٹریشن کے بعد، پروڈکٹ کو تین بار صاف پانی سے دھوئیں اور اسے استعمال کے لیے ویکیوم ڈرائینگ باکس میں رکھیں۔ KOH یا P2O5 خشک ہونے دیں۔

ایسٹک ایسڈ کو پتلا کریں:

AcOH/TFE/DCM استعمال کریں (2:2:6) رال پر لٹکنے والے پیپٹائڈس کو کٹنگ سلوشن سے 2 گھنٹے تک ٹریٹ کریں، رال کو فلٹر کریں، اور رال کو تین بار کٹنگ سلوشن سے دھو لیں۔ مخلوط فلٹریٹ میں n-ہیکسین کے حجم کا 15 گنا اضافہ کریں، اور اضافی ایسٹک ایسڈ کو ہٹانے کے لیے روٹری بخارات بنیں۔ پیپٹائڈ کی بازیابی کے طریقے ذیل میں تفصیلی ہیں۔

قابل اطلاق رال:2- CTC رال